آموزش چرخه سلول

آموزش چرخه سلول دکتر ناهید امانی

مرحله (G1 (GAP1

• در مرحله‌ی G1 سلول‌ها می‌توانند در جهت سنتز DNA و تقسیم سلولی دیگر پیش روند و یا اینکه چرخه‌ی سلولی به شکل برگشت‌پذیر (G0) و یا برگشت ناپذیر تمایز یابد، به نحوی که در این مرحله وجود نقاط تنظیمی خاص می‌تواند سرنوشت سلول را برای تمایز و یا وارد شدن به چرخه سلولی تعیین کند.

مراحل (G2 (GAP2  و سنتز (S)

• در مرحله‌ی G2 و S وجود نقاط کنترل بی‌نقص بودن DNA را تایید می‌کنند. در صورت وجود نقص در آن چرخه‌ی سلولی به سمت تعمیر و یا مرگ برنامه‌ریزی شده ( آپوپتوز) پیش خواهد رفت. آپوپتوز به روش‌های مختلف در تکنیک‎های آزمایشگاهی سلولی قابل تشخیص می باشد.

تمایز

• با افزایش تکثیر، بیان مارکرهای تمایز محدود می‌شود، پس برای القاء تمایز در تراکم سلولی بالا، افزایش میان کنش سلول- سلول، سلول-ماتریکس و وجود مارکرهای تمایز، مانع تکثیر سلول و القای تمایز می‌شود.

فروشگاه تمادکالا انواع تجهیزات آموزشی و اسباب بازی ها را با کیفیت بالا و قیمت مناسب عرضه می کند. خرید محصولات تمادکالا به صورت اینترنتی صورت گرفته و امکان ارسال به اقصی نقاط کشور وجود دارد.

پوستر آموزشی تقسیم سلولی تقسیم سلولی و مراحل میتوز به صورت کامل توضیح داده شده است. مراحل چرخه سلولی در این پوستر قابل مشاهده است. ابعاد پوستر 70*100 سانتی متر است. روی آن لمینت مات شده است.خرید پوستر آموزشی تقسیم سلولی (میتوز) در فروشگاه تمادکالا به صورت آنلاین صورت می گیرد. پس از ثبت سفارش از طریق همین صفحه، محصول مورد نظر با پست پیشتاز به تهران و سایر شهرستان ها فرستاده می شود. برای کسب اطلاعات بیشتر با کارشناسان مجموعه تمادکالا تماس حاصل بفرمایید.چکیده
سابقه و هدف
به­ دلیل نقش تلومراز در تکثیر نامحدود اکثر سلول­های سرطانی از جمله بدخیمی­های خونی، مهار تلومراز به عنوان روش مناسبی جهت درمان سرطان­ها مطرح می­باشد. هدف از مطالعه، ­بررسی اثر BIBR1532 که یک مهارکننده سنتتیک hTERT می­باشد، بر روی فعالیت متابولیک، میزان ساخت DNA ، تغییرات چرخه سلولی و بیان ژن­های p21، p73، Bax و Bad در سلول­هایNalm-6  (رده سلولی لوسمی لنفوبلاستیک حاد) بود.
مواد و روش‌ها
در این مطالعه تجربی به ­منظور بررسی اثر BIBR1532 ، سلول­ها در حضور غلظت­های مختلف دارو کشت داده ­شدند و متعاقباً آزمون­های BrdU cell proliferation assay ، Microculture Tetrazolium Test،Flowcytometeric cell cycle arrest  و  Quantitative real-time انجام شد.
یافته‌ها
نتایج به دست ­آمده نشان داد که BIBR1532 دارای اثر مهاری بر فعالیت متابولیک و ساخت DNA سلول­های رده  Nalm-6به ­طور وابسته به دوز و زمان می­باشد. هم چنین نتایج حاکی از افزایـش بیـانmRNA  ژن‌هایBad  ، Bax ،p73  و p21 بود که خود متعاقباً با توقف چرخه سلولی در مرحله G₁ و افزایش مرحله Sub-G₁ همراه می­باشد.
نتیجه گیری
از آن جایی ­که تیمار با داروی BIBR1532 در رده سلولی Nalm-6 سبب القاء توقف چرخه سلولی و فعال شدن مسیر آپوپتوز می­گردد، لذا می­توان از افزوده شدن درمان­های مبتنی بر داروهای آنتی­تلومراز به عنوان یک استراتژی جدید در درمان مبتلایان به لوسمی لنفوبلاستیک حاد بهره جست.

لوسمی لنفوبلاستیک حاد(ALL)، شایع­ترین سرطان دوران کودکی بوده و حدود 30% از سرطان­های این دوران را به خود اختصاص می­دهد. هر چند بیشترین شیوع ALL مربوط به سنین 2 تا 5 سال می­باشد، با این حال، احتمال ابتلا به این لوسمی در افراد جوان و مسن نیز وجود دارد(1). علی­رغم میزان بالای پاسخ به درمان در این بیماری، مقاومت به درمان­های متداول و عود بیماری، هم چنان به عنوان یک معضل مهم مطرح است(2). بدیهی است که درک کامل مکانیسم­هایی که سبب مقاومت در برابر داروهای شیمی­درمانی می­شوند، می­توانند سبب معرفی درمان­های جدید در این بیماری شود(3). اگر چه ماهیت کلینیکی سرطان­ها بسیار هتروژن می­باشد، اما اکثر تومورها در تعداد محدودی از ویژگی­ها هم چون توانایی تکثیر نامحدود، رشد غیر قابل کنترل، تهاجم به بافت­ها و انتشار متاستاتیک مشترک هستند(4). بسیاری از مطالعه‌ها نشان داده­اند که کسب توانایی تکثیر نامحدود در سلول­های سرطانی که عمدتاً ناشی از فعالیت آنزیم تلومراز است، مهم­ترین مرحله در پیشرفت سرطان می­باشد(5). تلومراز، آنزیمی است که بعد از همانندسازی فعال شده و باعث افزودن تعداد نسبتاً زیادی نوکلئوتید به انتهای کروموزوم­ها می­شود. این آنزیم که یک کمپلکس چند پروتئینی با ساختار ریبونوکلئوپروتئین است، دارای فعالیت ترانس کریپتاز معکوس(RT) بوده و قادر است از رویRNA  ، مولکول  DNAتولید کند(8-6). مشخص شده است که آنزیم تلومراز در 90% از بدخیمی­ها افزایش بیان دارد، این در حالی است که در سلول­های نرمال این آنزیم بیان نشده و غیرفعال می­باشد. مطالعه‌های بسیاری نشان می­دهد که هدف قرار دادن فعالیت تلومراز در بسیاری از تومورها سبب تداخل در عملکرد تلومر و در نتیجه مرگ سلولی می­شود(9)؛ از این رو می­توان از مهارکننده­های تلومراز به عنوان اهداف درمانی امیدوار کننده در مهار رشد و تکثیر سرطان بهره جست.
در میان این دسته از داروها، BIBR1532 به عنوان مهارکننده اختصاصی hTERT توجه ویژه­ای را به خود اختصاص داده است(10). مطالعه‌ها نشان داده­اند که مهار تلومراز با استفاده از BIBR1532 در بسیاری از سلول­های سرطانی هم چون پروستات، پستان، ریه و فیبروسارکوما منجر به کاهش طول تلومر و القاء مرگ سلولی می‌شود(11). هم چنین اثر سایتوتوکسیک مستقیم این دارو در کوتاه مدت، بدون تاثیر بر سلول­های نرمال، بر روی سلول­های لوسمی میلوئیدی حاد و لوسمی لنفوئیدی مزمن نیز به صورت وابسته به دوز و زمان نشان داده شده است(12). نتایج حاصل از مطالعه اخیر توسط شی و همکاران نشان داد که استفاده از این دارو در سرطان سینه سبب القاء آپوپتوز از طریق مهار تلومر و توقف چرخه سلولی در مرحله G₁ می­شود(13). با توجه به ­این که مشخص شده است که بیان آنزیم تلومراز در مبتلایان به ALL افزایش دارد، لذا در این مطالعه بر آن شدیم تا کارآیی استراتژی مبتنی بر استفاده از داروهای آنتی­تلومراز را در رده سلولی Nalm-6 (Pre-B ALL cell) بررسی کنیم.

مواد و روش‌ها
کشت سلولی و تیمار دارویی:
در این مطالعه تجربی، سلول­های Nalm-6 (سلول­های رده لوسمی لنفوبلاستیک حاد) به صورت سوسپانسیون در محیط کشت RPMI1640 حاوی 2 میلی­مولار از ال-گلوتامین، 10%FBS  ، پنی­سیلین به میزان  U/mL100 و استرپتومایسین به ­میزان µg/mL 100 در دمای 37 درجه سانتی­گراد و فشار 5% از  CO₂کشت داده شدند. برای تیمار دارویی سلول­ها از داروی BIBR1532 (آمریکا-بیوسانس) که به صورت پودر می­باشد، استفاده شد. محلول ذخیره BIBR1532 در غلظت  mM1 و به ­واسطه حل کردن این دارو در  DMSOاستریل تهیه شد. محلول ذخیره را در میکروتیوب­ها تقسیم کرده و آن‌ها را در دمای20- درجه سانتی‌گراد تا زمان مصرف نگهداری کردیم. به منظور تعیین اثرات بهینه BIBR1532 ، دو متغیر دوز و زمان در نظر گرفته شد؛ بدین ترتیب که سلول­های سرطانی Nalm-6 با غلظت­های 10، 30 و 60 میکر­ومولار از دارو طی مدت زمان­های 24، 36 و 48 ساعت تیمار شدند. در این مطالعه، سلول­های تیمار نشده با دارو به عنوان گروه کنترل در نظر گرفته شده است. در ضمن به­ منظور افزایش بهره­وری کار و بررسی مقایسه­ای، تمامی آزمایش­ها برای هر دوز و زمان به صورت تریپلیکیت انجام شد.

اندازه­گیری فعالیت متابولیک سلولی:
برای بررسی اثر مهاری داروی BIBR1532 بر روی فعالیت متابولیک سلولی، تعداد 10000 سلول در هر میلی‌لیتر در حضور یا عدم حضور دارو به مدت 24، 36 و 48 ساعت انکوبه شدند.
بعد از اتمام زمان تیمار، محلول MTT در غلظت  mg/mL5 به سلول­های درون چاهک­های پلیت 96 خانه اضافه شد و به مدت 3 ساعت دیگر در 37 درجه سانتی­گراد انکوبه شدند. پس از طی زمان انکوباسیون، پلیت حاوی سلول­ها با دور g 1000 به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ شد. سپس محلول رویی چاهک­ها خالی گردید و 100 میکرولیتر محلول DMSO به هر چاهک اضافه شد. در ادامه، جذب نوری نمونه­ها در طول موج 570 نانومتر اندازه­گیری شد.

بررسی میزان ساخت DNA :
اثر مهاری  BIBR1532بر روی تکثیر سلول­های Nalm-6 از طریق تعیین میزان مشارکت برموداکسی‌­یوریدین در DNA سلول­های Nalm-6 با استفاده از BrdU-based cell proliferation ELISA kit طبق دستورالعمل کیت اندازه‌گیری شد. به ­طور خلاصه، تعداد 5000 سلول در هر چاهک درون پلیت 96 تایی در حضور یا عدم حضور BIBR1532 کشت داده ­شدند. 12 ساعت مانده به انتهای زمان انکوباسیون، 10 میکرولیتر محلول BrdU که در کیت موجود می­باشد، به سلول­ها افزوده شد؛ در ادامه و با استفاده از محلول FixDenat ، سلول­ها فیکس شده و DNA آن‌ها دناتوره گشت. سلول­ها با آنتی­بادی علیه BrdU که با آنزیم پراکسیداز کنژوگه می­باشد، به مدت 1 ساعت در دمای اتاق انکوبه شده و در انتهای این زمان، 100 میکرولیتر سوبسترای TMB افزوده شد. پس از گذشت 30 دقیقه در دمای اتاق و آن هم به منظور پایان دادن به عملکرد آنزیم پراکسیداز، از محلول اسید سولفوریک 1 مولار استفاده شد. در انتها، میزان رنگ ایجاد شده در هر چاهک با استفاده از دستگاه الایزا ریدر در طول موج nm 450 خوانده ­شد. در نهایت و برای محاسبه اثر مهاریBIBR1532  بر روی تکثیر و بررسی میزان کاهش ساخت DNA سلول­های Nalm-6 تیمار شده از فرمول زیر استفاده شد:

مرحله (G1 (GAP1

• در مرحله‌ی G1 سلول‌ها می‌توانند در جهت سنتز DNA و تقسیم سلولی دیگر پیش روند و یا اینکه چرخه‌ی سلولی به شکل برگشت‌پذیر (G0) و یا برگشت ناپذیر تمایز یابد، به نحوی که در این مرحله وجود نقاط تنظیمی خاص می‌تواند سرنوشت سلول را برای تمایز و یا وارد شدن به چرخه سلولی تعیین کند.

مراحل (G2 (GAP2  و سنتز (S)

• در مرحله‌ی G2 و S وجود نقاط کنترل بی‌نقص بودن DNA را تایید می‌کنند. در صورت وجود نقص در آن چرخه‌ی سلولی به سمت تعمیر و یا مرگ برنامه‌ریزی شده ( آپوپتوز) پیش خواهد رفت. آپوپتوز به روش‌های مختلف در تکنیک‎های آزمایشگاهی سلولی قابل تشخیص می باشد.

تمایز

• با افزایش تکثیر، بیان مارکرهای تمایز محدود می‌شود، پس برای القاء تمایز در تراکم سلولی بالا، افزایش میان کنش سلول- سلول، سلول-ماتریکس و وجود مارکرهای تمایز، مانع تکثیر سلول و القای تمایز می‌شود.

فروشگاه تمادکالا انواع تجهیزات آموزشی و اسباب بازی ها را با کیفیت بالا و قیمت مناسب عرضه می کند. خرید محصولات تمادکالا به صورت اینترنتی صورت گرفته و امکان ارسال به اقصی نقاط کشور وجود دارد.

پوستر آموزشی تقسیم سلولی تقسیم سلولی و مراحل میتوز به صورت کامل توضیح داده شده است. مراحل چرخه سلولی در این پوستر قابل مشاهده است. ابعاد پوستر 70*100 سانتی متر است. روی آن لمینت مات شده است.خرید پوستر آموزشی تقسیم سلولی (میتوز) در فروشگاه تمادکالا به صورت آنلاین صورت می گیرد. پس از ثبت سفارش از طریق همین صفحه، محصول مورد نظر با پست پیشتاز به تهران و سایر شهرستان ها فرستاده می شود. برای کسب اطلاعات بیشتر با کارشناسان مجموعه تمادکالا تماس حاصل بفرمایید.چکیده
سابقه و هدف
به­ دلیل نقش تلومراز در تکثیر نامحدود اکثر سلول­های سرطانی از جمله بدخیمی­های خونی، مهار تلومراز به عنوان روش مناسبی جهت درمان سرطان­ها مطرح می­باشد. هدف از مطالعه، ­بررسی اثر BIBR1532 که یک مهارکننده سنتتیک hTERT می­باشد، بر روی فعالیت متابولیک، میزان ساخت DNA ، تغییرات چرخه سلولی و بیان ژن­های p21، p73، Bax و Bad در سلول­هایNalm-6  (رده سلولی لوسمی لنفوبلاستیک حاد) بود.
مواد و روش‌ها
در این مطالعه تجربی به ­منظور بررسی اثر BIBR1532 ، سلول­ها در حضور غلظت­های مختلف دارو کشت داده ­شدند و متعاقباً آزمون­های BrdU cell proliferation assay ، Microculture Tetrazolium Test،Flowcytometeric cell cycle arrest  و  Quantitative real-time انجام شد.
یافته‌ها
نتایج به دست ­آمده نشان داد که BIBR1532 دارای اثر مهاری بر فعالیت متابولیک و ساخت DNA سلول­های رده  Nalm-6به ­طور وابسته به دوز و زمان می­باشد. هم چنین نتایج حاکی از افزایـش بیـانmRNA  ژن‌هایBad  ، Bax ،p73  و p21 بود که خود متعاقباً با توقف چرخه سلولی در مرحله G₁ و افزایش مرحله Sub-G₁ همراه می­باشد.

یافته‌ها
نتایج به دست ­آمده نشان داد که BIBR1532 دارای اثر مهاری بر فعالیت متابولیک و ساخت DNA سلول­های رده  Nalm-6به ­طور وابسته به دوز و زمان می­باشد. هم چنین نتایج حاکی از افزایـش بیـانmRNA  ژن‌هایBad  ، Bax ،p73  و p21 بود که خود متعاقباً با توقف چرخه سلولی در مرحله G₁ و افزایش مرحله Sub-G₁ همراه می­باشد.
نتیجه گیری
از آن جایی ­که تیمار با داروی BIBR1532 در رده سلولی Nalm-6 سبب القاء توقف چرخه سلولی و فعال شدن مسیر آپوپتوز می­گردد، لذا می­توان از افزوده شدن درمان­های مبتنی بر داروهای آنتی­تلومراز به عنوان یک استراتژی جدید در درمان مبتلایان به لوسمی لنفوبلاستیک حاد بهره جست.

لوسمی لنفوبلاستیک حاد(ALL)، شایع­ترین سرطان دوران کودکی بوده و حدود 30% از سرطان­های این دوران را به خود اختصاص می­دهد. هر چند بیشترین شیوع ALL مربوط به سنین 2 تا 5 سال می­باشد، با این حال، احتمال ابتلا به این لوسمی در افراد جوان و مسن نیز وجود دارد(1). علی­رغم میزان بالای پاسخ به درمان در این بیماری، مقاومت به درمان­های متداول و عود بیماری، هم چنان به عنوان یک معضل مهم مطرح است(2). بدیهی است که درک کامل مکانیسم­هایی که سبب مقاومت در برابر داروهای شیمی­درمانی می­شوند، می­توانند سبب معرفی درمان­های جدید در این بیماری شود(3). اگر چه ماهیت کلینیکی سرطان­ها بسیار هتروژن می­باشد، اما اکثر تومورها در تعداد محدودی از ویژگی­ها هم چون توانایی تکثیر نامحدود، رشد غیر قابل کنترل، تهاجم به بافت­ها و انتشار متاستاتیک مشترک هستند(4). بسیاری از مطالعه‌ها نشان داده­اند که کسب توانایی تکثیر نامحدود در سلول­های سرطانی که عمدتاً ناشی از فعالیت آنزیم تلومراز است، مهم­ترین مرحله در پیشرفت سرطان می­باشد(5). تلومراز، آنزیمی است که بعد از همانندسازی فعال شده و باعث افزودن تعداد نسبتاً زیادی نوکلئوتید به انتهای کروموزوم­ها می­شود. این آنزیم که یک کمپلکس چند پروتئینی با ساختار ریبونوکلئوپروتئین است، دارای فعالیت ترانس کریپتاز معکوس(RT) بوده و قادر است از رویRNA  ، مولکول  DNAتولید کند(8-6). مشخص شده است که آنزیم تلومراز در 90% از بدخیمی­ها افزایش بیان دارد، این در حالی است که در سلول­های نرمال این آنزیم بیان نشده و غیرفعال می­باشد. مطالعه‌های بسیاری نشان می­دهد که هدف قرار دادن فعالیت تلومراز در بسیاری از تومورها سبب تداخل در عملکرد تلومر و در نتیجه مرگ سلولی می­شود(9)؛ از این رو می­توان از مهارکننده­های تلومراز به عنوان اهداف درمانی امیدوار کننده در مهار رشد و تکثیر سرطان بهره جست.
در میان این دسته از داروها، BIBR1532 به عنوان مهارکننده اختصاصی hTERT توجه ویژه­ای را به خود اختصاص داده است(10). مطالعه‌ها نشان داده­اند که مهار تلومراز با استفاده از BIBR1532 در بسیاری از سلول­های سرطانی هم چون پروستات، پستان، ریه و فیبروسارکوما منجر به آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول کاهش طول تلومر و القاء مرگ سلولی می‌شود(11). هم چنین اثر سایتوتوکسیک مستقیم این دارو در کوتاه مدت، بدون تاثیر بر سلول­های نرمال، بر روی سلول­های لوسمی میلوئیدی حاد و لوسمی لنفوئیدی مزمن نیز به صورت وابسته به دوز و زمان نشان داده شده است(12). نتایج حاصل از مطالعه اخیر توسط شی و همکاران نشان داد که استفاده از این دارو در سرطان سینه سبب القاء آپوپتوز از طریق مهار تلومر و توقف چرخه سلولی در مرحله G₁ می­شود(13). با توجه به ­این که مشخص شده است که بیان آنزیم تلومراز در مبتلایان به ALL افزایش دارد، لذا در این مطالعه بر آن شدیم تا کارآیی استراتژی مبتنی بر استفاده از داروهای آنتی­تلومراز را در رده سلولی Nalm-6 (Pre-B ALL cell) بررسی کنیم.

مواد و روش‌ها
کشت سلولی و تیمار دارویی:
در این مطالعه تجربی، سلول­های Nalm-6 (سلول­های رده لوسمی لنفوبلاستیک حاد) به صورت سوسپانسیون در محیط کشت RPMI1640 حاوی 2 میلی­مولار از ال-گلوتامین، 10%FBS  ، پنی­سیلین به میزان  U/mL100 و استرپتومایسین به ­میزان µg/mL 100 در دمای 37 درجه سانتی­گراد و فشار 5% از  CO₂کشت داده شدند. برای تیمار دارویی سلول­ها از داروی BIBR1532 (آمریکا-بیوسانس) که به صورت پودر می­باشد، استفاده شد. محلول ذخیره BIBR1532 در غلظت  mM1 و به ­واسطه حل کردن این دارو در  DMSOاستریل تهیه شد. محلول ذخیره را در میکروتیوب­ها تقسیم کرده و آن‌ها را در دمای20- درجه سانتی‌گراد تا زمان مصرف نگهداری کردیم. به منظور تعیین اثرات بهینه BIBR1532 ، دو متغیر دوز و زمان در نظر گرفته شد؛ بدین ترتیب که سلول­های سرطانی Nalm-6 با غلظت­های 10، 30 و 60 میکر­ومولار از دارو طی مدت زمان­های 24، 36 و 48 ساعت تیمار شدند. در این مطالعه، سلول­های تیم

نتیجه گیری
از آن جایی ­که تیمار با داروی BIBR1532 در رده سلولی Nalm-6 سبب القاء توقف چرخه سلولی و فعال شدن مسیر آپوپتوز می­گردد، لذا می­توان از افزوده شدن درمان­های مبتنی بر داروهای آنتی­تلومراز به عنوان یک استراتژی جدید در درمان مبتلایان به لوسمی لنفوبلاستیک حاد بهره جست.

لوسمی لنفوبلاستیک حاد(ALL)، شایع­ترین سرطان دوران کودکی بوده و حدود 30% از سرطان­های این دوران را به خود اختصاص می­دهد. هر چند بیشترین شیوع ALL مربوط به سنین 2 تا 5 سال می­باشد، با این حال، احتمال ابتلا به این لوسمی در افراد جوان و مسن نیز وجود دارد(1). علی­رغم میزان بالای پاسخ به درمان در این بیماری، مقاومت به درمان­های متداول و عود بیماری، هم چنان به عنوان یک معضل مهم مطرح است(2). بدیهی است که درک کامل مکانیسم­هایی که سبب مقاومت در برابر داروهای شیمی­درمانی می­شوند، می­توانند سبب معرفی درمان­های جدید در این بیماری شود(3). اگر چه ماهیت کلینیکی سرطان­ها بسیار هتروژن می­باشد، اما اکثر تومورها در تعداد محدودی از ویژگی­ها هم چون توانایی تکثیر نامحدود، رشد غیر قابل کنترل، تهاجم به بافت­ها و انتشار متاستاتیک مشترک هستند(4). بسیاری از مطالعه‌ها نشان داده­اند که کسب توانایی تکثیر نامحدود در سلول­های سرطانی که عمدتاً ناشی از فعالیت آنزیم تلومراز است، مهم­ترین مرحله در پیشرفت سرطان می­باشد(5). تلومراز، آنزیمی است که بعد از همانندسازی فعال شده و باعث افزودن تعداد نسبتاً زیادی نوکلئوتید به انتهای کروموزوم­ها می­شود. این آنزیم که یک کمپلکس چند پروتئینی با ساختار ریبونوکلئوپروتئین است، دارای فعالیت ترانس کریپتاز معکوس(RT) بوده و قادر است از رویRNA  ، مولکول  DNAتولید کند(8-6). مشخص شده است که آنزیم تلومراز در 90% از بدخیمی­ها افزایش بیان دارد، این در حالی است که در سلول­های نرمال این آنزیم بیان نشده و غیرفعال می­باشد. مطالعه‌های بسیاری نشان می­دهد که هدف قرار دادن فعالیت تلومراز در بسیاری از تومورها سبب تداخل در عملکرد تلومر و در نتیجه مرگ سلولی می­شود(9)؛ از این رو می­توان از مهارکننده­های تلومراز به عنوان اهداف درمانی امیدوار کننده در مهار رشد و تکثیر سرطان بهره جست. آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول
در میان این دسته از داروها، BIBR1532 به عنوان مهارکننده اختصاصی hTERT توجه ویژه­ای را به خود اختصاص داده است(10). مطالعه‌ها نشان داده­اند که مهارر آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول تلومراز با استفاده از BIBR1532 در بسیاری از سلول­های سرطانی هم چون پروستات، پستان، آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول ریه و فیبروسارکوما منجر به کاهش طول تلومر و القاء مرگ سلولی می‌شود(11). هم چنین اثر سایتوتوکسیک مستقیم این دارو در کوتاه مدت، بدون تاثیر بر سلول­های نرمال، بر روی سلول­های لوسمی میلوئیدی حاد و لوسمی لنفوئیدی مزمن نیز به صورت وابسته به دوز و زمان نشان داده شده است(12). نتایج حاصل از مطالعه اخیر توسط شی و همکاران نشان داد که استفاده از این دارو در سرطان سینه سبب القاء آپوپتوز از طریق مهار تلومر و توقف چرخه سلولی در مرحله G₁ می­شود(13). با آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول توجه به ­این که مشخص شده است که بیان آنزیم تلومراز در مبتلایان به ALL افزایش دارد، لذا در این مطالعه بر آن شدیم تا کارآیی استراتژی مبتنی بر استفاده از داروهای آنتی­تلومراز را در رده سلولی Nalm-6 (Pre-B ALL cell) بررسی کنیم.

مواد و روش‌ها
کشت سلولی و تیمار دارویی:
در این مطالعه تجربی، سلول­های Nalm-6 (سلول­های رده لوسمی لنفوبلاستیک حاد) به صورت سوسپانسیون در محیط کشت RPMI1640 حاوی 2 میلی­مولار از ال-گلوتامین، 10%FBS  ، پنی­سیلین به میزان  U/mL100 و استرپتومایسین به ­میزان µg/mL 100 در دمای 37 درجه سانتی­گراد و فشار 5% از  CO₂کشت داده شدند. برای تیمار دارویی سلول­ها از داروی BIBR1532 (آمریکا-بیوسانس) که به صورت پودر می­باشد، استفاده شد. محلول ذخیره BIBR1532 در غلظت  mM1 و به ­واسطه حل کردن این دارو در  DMSOاستریل تهیه شد. محلول ذخیره را در میکروتیوب­ها تقسیم کرده و آن‌ها را در دمای20- درجه سانتی‌گراد تا زمان مصرف نگهداری کردیم. به منظور تعیین اثرات بهینه BIBR1532 ، دو متغیر دوز و زمان در نظر گرفته شد؛ بدین ترتیب که سلول­های آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول سرطانی Nalm-6 با غلظت­های 10، 30 و 60 میکر­ومولار از دارو طی مدت زمان­های 24، 36 و 48 ساعت تیمار شدند. در این مطالعه، سلول­های تیمار نشده با دارو به عنوان گروه کنترل در نظر گرفته شده است. در ضمن به­ منظور افزایش بهره­وری کار و بررسی مقایسه­ای، تمامی آزمایش­ها برای هر دوز و زمان به صورت تریپلیکیت انجام شد.
آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول
اندازه­گیری فعالیت متابولیک سلولی:
برای بررسی اثر مهاری داروی BIBR1532 بر روی فعالیت متابولیک سلولی، تعداد 10000 سلول در هر میلی‌لیتر در حضور یا عدم حضور دارو به مدت 24، 36 و 48 ساعت انکوبه شدند.
بعد از اتمام زمان تیمار، محلول MTT در غلظت  mg/mL5 به سلول­های درون چاهک­های پلیت 96 خانه اضافه شد و به مدت 3 ساعت دیگر در 37 درجه سانتی­گراد انکوبه شدند. پس از طی زمان انکوباسیون، پلیت حاوی سلول­ها با دور g 1000 به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ شد. سپس محلول رویی چاهک­ها خالی گردید و 100 میکرولیتر محلول DMSO به هر چاهک اضافه شد. در ادامه، جذب نوری نمونه­ها در طول موج 570 نانومتر اندازه­گیری شد.

بررسی میزان ساخت DNA :
اثر مهاری  BIBR1532بر روی تکثیر سلول­های Nalm-6 از طریق تعیین میزان مشارکت برموداکسی‌­یوریدین در DNA سلول­های Nalm-6 با استفاده از BrdU-based cell proliferation ELISA kit طبق دستورالعمل کیت اندازه‌گیری شد. به ­طور خلاصه، تعداد 5000 سلول در هر چاهک درون پلیت 96 تایی در حضور یا عدم حضور BIBR1532 کشت داده ­شدند. 12 ساعت مانده به انتهای زمان انکوباسیون، 10 میکرولیتر محلول BrdU که در کیت موجود می­باشد، به سلول­ها افزوده شد؛ در ادامه و با استفاده از محلول FixDenat ، سلول­ها فیکس آموزش چرخه سلول شده و DNA آن‌ها دناتوره گشت. سلول­ها با آنتی­بادی علیه BrdU که با آنزیم پراکسیداز کنژوگه می­باشد، به مدت 1 ساعت در دمای اتاق انکوبه شده و در انتهای این زمان، 100 میکرولیتر سوبسترای TMB افزوده شد. پس از گذشت 30 دقیقه در دمای اتاق و آن هم به منظور پایان دادن به عملکرد آنزیم پراکسیداز، از محلول اسید سولفوریک 1 مولار استفاده شد. در انتها، میزان رنگ ایجاد شده در هر چاهک آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول آموزش چرخه سلول با استفاده از دستگاه الایزا ریدر در طول موج nm 450 خوانده ­شد. در نهایت و برای محاسبه اثر مهاریBIBR1532  بر روی تکثیر و بررسی میزان کاهش ساخت DNA سلول­های Nalm-6 تیمار شده از فرمول زیر استفاده شد: